多肽合成儀功能操作

        工作原理
        多肽合成儀采用固相合成作為反應(yīng)原理。在密閉的防爆玻璃反應(yīng)器中，按已知的順序（順序，一般是從C端到N端再到N端）不斷加入氨基酸進(jìn)行反應(yīng)，合成，操作，最終得到多肽載體。固相合成法大大降低了每一步產(chǎn)品純化的難度。為了防止副反應(yīng)的發(fā)生，參與反應(yīng)的氨基酸的側(cè)鏈?zhǔn)艿奖Ｗo(hù)。羧基末端是游離的，必須在反應(yīng)前活化。有兩種固相合成方法，即 Fmoc 和 tBoc。因?yàn)镕moc相比tBoc有很多優(yōu)勢，大部分都是用Fmoc的方法合成的，但是對于一些短肽來說，tBoc由于產(chǎn)量高的優(yōu)勢還是被很多公司采用。
        具體的合成包括以下循環(huán)：
         1）脫保護(hù)：Fmoc保護(hù)的柱子和單體必須用堿性溶劑（哌啶）脫去氨基的保護(hù)基。
         2) 活化和交聯(lián)：下一個(gè)氨基酸的羧基被活化劑活化。活化的單體與游離氨基反應(yīng)形成肽鍵。在這一步中，使用了大量的超濃縮試劑來推動反應(yīng)完成。循環(huán)：兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)，直至合成完成。
         3) 洗脫脫保護(hù)：肽從柱子上洗脫下來，其保護(hù)基通過脫保護(hù)劑（TFA）洗脫和脫保護(hù)。
        基本組件
        反應(yīng)堆
        數(shù)百年來，制藥工業(yè)中最常見的反應(yīng)器/反應(yīng)器設(shè)備類型是玻璃。由于其*透明和耐腐蝕，已被許多化學(xué)和生物專家使用。多肽合成過程需要操作人員直觀監(jiān)控，合成后可在線切割（切割試劑TFA的強(qiáng)腐蝕性極大地限制了反應(yīng)器的材質(zhì)）。這些要求限制了反應(yīng)器由玻璃制成。玻璃制反應(yīng)釜在制造工藝上有很大的難度限制：①燒成工藝：研磨精度*，正如國內(nèi)很多設(shè)備不能滿足漏液漏氣要求，玻璃壁的均勻性. ②具有攪拌手柄和密封裝置的完整加工工藝 ③防爆處理
        氨基酸儲罐
        用于儲存氨基酸粉末或預(yù)活化的溶解氨基酸溶液。小型合成器的氨基酸儲罐數(shù)量一般在20-40個(gè)之間，以保證全自動縮合反應(yīng)在無人看管的情況下順利進(jìn)行。大型合成器根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模有不同的配置。
        溶劑儲罐
        用來存放有機(jī)溶液，如DMF、PIP等。
        量筒用于測量氨基酸溶液和其他試劑的合成量。它需要一個(gè)精密傳感器來設(shè)計(jì)秤并將信息返回給計(jì)算機(jī)控制程序。由于早期的恒壓法偏差大，操作繁瑣，故采用此法進(jìn)行測量。觸發(fā)器的數(shù)量取決于不同客戶的要求，不同品牌略有不同。
        轉(zhuǎn)移瓶
        傳感器
        多端觸發(fā)自感應(yīng)定量測量方法，直觀、科學(xué)、相對誤差zui低。代替早期的恒壓法，避免了每天進(jìn)行大量的數(shù)學(xué)運(yùn)算，運(yùn)算更簡單，測量誤差值可控制在1%以內(nèi)。
        廢液桶
        廢液桶通常是一個(gè)大的HDPE桶，以保證良好的通風(fēng)。同時(shí)，需要安裝感應(yīng)裝置，隨時(shí)檢測廢液，避免溢出。
        控制配件
        電磁閥
        肽合成儀中的電磁閥是一個(gè)靈敏的附件，它控制著液路的串聯(lián)和閉合回路，在氨基酸轉(zhuǎn)移與測定、溶劑轉(zhuǎn)移與測定兩個(gè)步驟中起著非常重要的作用。不同品牌的合成器的電磁閥設(shè)計(jì)和布置略有不同。
        控制面板
        控制面板通常包含光敏元件、一些控制電磁閥和傳感器控制組。它與上位機(jī)和合成儀的控制系統(tǒng)統(tǒng)一聯(lián)動，完成多肽合成的全過程。
        軟件系統(tǒng)
        肽合成儀的操作軟件。不同品牌的合成器有不同的注冊軟件。
        檢測方法
        a) 紫外線監(jiān)測器
        在多肽合成儀中，UV Monitor等偶聯(lián)效應(yīng)在線檢測裝置往往是可選裝置，客戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要購買。它的作用是讓操作者可以直觀的看到肽合成中各個(gè)氨基酸的偶聯(lián)效果，從而針對特定的序列調(diào)整合成設(shè)置，最終達(dá)到最佳的合成效果。
        對于不熟悉多肽合成儀操作的用戶來說，UV Monitor非常重要。
         b) 試劑檢測
        茚三酮檢測原理
        未購買在線檢測配件的肽合成儀用戶也可以使用試劑檢測方法進(jìn)行基本的偶聯(lián)效應(yīng)測定實(shí)驗(yàn)。
        在固相肽合成中，連接效率主要通過檢測樹脂上的游離氨基來確定。該檢測方法稱為Kaiser方法。檢測結(jié)果，如果有游離氨基，則顯示藍(lán)色或紅棕色（pro、ser、His）。
         Kaiser 試劑包括： A、6%茚三酮的乙醇溶液； B、80% 苯酚的乙醇溶液溶液：C、2% 0.001M KCN吡啶溶液 制劑中的吡啶需用茚三酮處理，再蒸餾后使用。檢測過程中，取少量樹脂，加入A、B、C各2-3滴，100℃加熱1-2分鐘。如果溶液呈藍(lán)色，或樹脂呈藍(lán)色或紅棕色，則表明存在游離氨基。否則，表明連接完成。